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    EB 病毒轉(zhuǎn)化成淋巴細(xì)胞

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-11  點(diǎn)擊次數(shù): 1082次

    材料與儀器

    全血
    刀豆凝集素A
    RPMI 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 離心管

    步驟

    1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

    生長(zhǎng)培養(yǎng)基(RPMI1640 800 ml,F(xiàn)BS 200 ml,2 mmol/L-谷氨酰胺,5 μg/ml 兩性霉素,50 μg/ml 慶大霉素)

    2. 取 15 ml 無(wú)菌離心管,加 3 ml Histo-paque1077(Sigma),在其上加 4 ml 稀釋血,分離淋巴細(xì)胞。

    3. 室溫 300 g 離心 30 分鐘,棄上層清亮血漿。

    4. 收集不透明淋巴細(xì)胞層,細(xì)胞懸液倒入 50 ml 無(wú)菌離心管。

    5. 20 ml RPMI 1640 生長(zhǎng)培養(yǎng)基洗兩次,室溫 300 g 離心 10 分鐘。

    6. 10 ml 血分離的細(xì)胞懸于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。

    7. 細(xì)胞懸液(1.0 ml)放入 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶,垂直放置,37℃ 5% CO2 孵育 1~3 小時(shí)。

    8. 孵育后,加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生長(zhǎng)培養(yǎng)基,水平放置,使細(xì)胞均勻分布于全生長(zhǎng)面。

    9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鮮 RPMI 1640 生長(zhǎng)培養(yǎng)基,不要吸出原培養(yǎng)基。


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