-
膠原酶解離組織
發(fā)布時(shí)間： 2022-12-07 點(diǎn)擊次數(shù)： 1191次原理
切碎的組織放于含有膠原酶的完-全培養(yǎng)基中孵育，組織分解后，通過(guò)離心去除膠原酶，高濃度接種、培養(yǎng)。
材料與儀器
膠原酶 DBSS
培養(yǎng)基 移液器 皮氏平皿 培養(yǎng)瓶 離心管 手術(shù)刀 離心機(jī)步驟
1. 將組織移人新鮮、無(wú)菌的 DBSS 中，淸洗。
2. 轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)皿（9 cm 皮氏平皿，非組織培養(yǎng)級(jí)別），切除多余組織，如脂肪或壞死組織。
3. 將組織轉(zhuǎn)移至第三個(gè)平皿中，用交叉的手術(shù)刀細(xì)切成大約 1 mm3 大小。
4. 用 10~20 ml 廣口移液管將組織移入 15 ml 或 25 ml 無(wú)菌離心管或常用的容器， 中（先用 DBSS 濕潤(rùn)移液管，否則組織塊易貼壁）。
5. 讓組織塊沉降。
6. 用 DBSS 重懸清洗組織，組織塊沉降后，去除上清液，重復(fù)此步驟兩次以上。
7. 將 20~30 個(gè)組織塊接種于一個(gè) 25 cm2 的培養(yǎng)瓶中，另一瓶中接種 100~200 塊。
8. 吸凈 DBSS，每瓶中加入 4.5 ml 含血清的培養(yǎng)基（如 DMEM/F12加10 % 胎牛血清）。
9. 加入 0.5 ml 粗制膠原酶（2000 U/ml，Worthington CLS 或 Sigma 1A），終濃度為 200 U/ml。
10. 于 37°C 培養(yǎng) 4~48 h，無(wú)需振蕩。腫瘤組織（如乳腺或結(jié)腸的硬癌）由于分解較慢，可作用 5 天或更長(zhǎng)時(shí)間。有時(shí)由于時(shí)間過(guò)長(zhǎng) pH 過(guò)度下降（pH<6. 5），要將組織離心并用新的培養(yǎng)基和膠原酶重懸。
11. 輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶檢查分離情況：組織塊呈點(diǎn)狀分布于培養(yǎng)瓶底部，適當(dāng)吸打后分散成單一細(xì)胞或小的組織塊。
12. 有些組織（肺、腎、結(jié)腸或乳腺癌）的部分上皮細(xì)胞小團(tuán)塊對(duì)膠原酶耐受，沉淀 2 min 即可與其他剩余組織分離。若將其用 DBSS 重懸，沉淀后將沉淀物接種于培養(yǎng)基中，將形成生長(zhǎng)旺盛的上皮細(xì)胞島。上皮細(xì)胞往往在未完-全解離時(shí)存活較好。
13. 完-全分解或組織塊沉降后，收集上清液中的細(xì)胞，于 50~100g 離心 3 min（離心管或常規(guī)容器，15~50 ml，依據(jù)處理組織的量而選擇） 。
14. 去除 DBSS 或培養(yǎng)基上清液，重懸，加入 5 ml 培養(yǎng)基，接種于 25 cm2 培養(yǎng)瓶中。若膠原酶作用時(shí) pH 下降了（pH< 6.5 達(dá) 48 h )，去除膠原酶后用 2 倍或 3 倍培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞懸液。
15. 于 48 h 后更換培養(yǎng)基。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實(shí)驗(yàn)耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測(cè)
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測(cè)系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫(kù)
-
蛋白研究系列
-
修飾檢測(cè)試劑盒
