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    哺乳動物中制備基因組 DNA 實驗

    發(fā)布時間: 2021-12-14  點擊次數(shù): 1174次

    材料與儀器

    動物組織
    PBS 乙酸銨 乙醇 酚 氯仿 異戊醇 TE
    離心機 搖床 研缽

    步驟


    1.  切下組織并立即剪成小塊,置于液氮中凍結。
     
    2.  將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎,或用錘子將其搗為細粉末,每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
     
    3.  500 g 離心細胞5 min,棄上請。貼壁生長細胞先用胰酶消化。

    4.  細胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸,500 g 離心5 min,棄上清,重復1次。

    5.  用1體積 的消化緩沖液重懸細胞。
     
    6.  將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。
     
    7.  用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品,1 700 g 離心10 min。

    8.  如果樣品溶解得不好, 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液,并重復離心。

    9  如果在界面上有一層厚的白色物質,重復有機抽提,將上層(水溶液)轉移至一個新管中。
     
    10.  加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉,1 700 g 離心2 min。
     
    11.  用70%乙酵洗滌,晾干,沉淀用TE。

    12.  緩沖液重新溶解,使終濃度在約1 mg/ml 左右。


    注意事項

    1.  如果是用肝組織,要除去膽囊,因其含有高水平的各種消化酶。

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    安培生物科技有限公司介紹:

    安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產(chǎn)品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產(chǎn)品和技術服務,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。


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